ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для бактериологических исследований Питательная среда для выделения сальмонелл сухая Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск
НАЗНАЧЕНИЕ
Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск предназначен для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения сальмонелл из исследуемого материала.
- характеристика
Висмут-сульфит-ГРМ агар представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-желтого цвета, получаемый смешиванием сухих компонентов.
Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Свежеприготовленная среда, благодаря бриллиантовой зелени и висмуту лимоннокислому, входящих в состав среды, обладает сильным ингибирующим эффектом в отношении сопутствующей микрофлоры.
Дифференцирующее действие среды основано на том, что образуемый бактериями из сульфата железа сероводород, вызывает почернение индикатора – цитрата висмута – вследствие перехода его в сульфид висмута, вещество черного цвета. Поэтому бактерии, образующие сероводород, формируют черные или черные с коричневым или темно-зеленым оттенком колонии, обладающие часто металлическим блеском. Среда под колониями, при этом, окрашена в черный цвет.
2.2. СОСТАВ
Висмут-сульфит-ГРМ агар представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:
| Панкреатический гидролизат рыбной муки……………… | 24,0 |
| Экстракт пекарных дрожжей ……………………………….. | 1,0 |
| Натрия хлорид …………………………………………… | 2,0 |
| Д-глюкоза .…………………….………………….….…. | 4,5 |
| Натрия гидрофосфат …………………………………… | 2,0 |
| Натрия сульфит …………………………………………….. | 4,0 |
| Висмут лимоннокислый . ……………………………… | 1,7 |
| Железо (II) сернокислое 7-водное …………………….. | 0,6 |
| Бриллиантовый зеленый ……..………………………… | 0,010-0,015 |
| Натрий углекислый ..……………………………….…. | 0,4-0,7 |
| Агар микробиологический ……………………….…… | 11,0±3,0 |
- АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Висмут-сульфит-ГРМ агар обеспечивает на всех засеянных чашках Петри рост тест-штаммов сальмонелл и их четкую дифференциацию от кишечной палочки не позднее 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С. На среде отсутствует рост стафилококков, некоторых клебсиелл, подавляется роение протея и частично рост эшерихий.
-
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
При анализе исследуемого материала – соблюдение СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности и гельминтами».
-
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
- Весы лабораторные 2 класса точности
- Автоклав
- Пробирки стеклянные
- Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
- Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
- Чашки Петри стерильные
- Вода дистиллированная
- Колбы
- Воронки стеклянные
-
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.
-
Проведение АНАЛИЗа
7.1. Приготовление среды Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск.
Порошок в количестве, необходимом для приготовления конкретной серии, тщательно размешивают в 1 л воды дистиллированной, кипятят при постоянном перемешивании в течение 3 мин до полного расплавления агара. Охлаждают до температуры 45-50 °С, взбалтывают, разливают в нестерильные чашки Петри слоем 4-5 мм и оставляют на рабочем столе с открытыми крышками для застывания и подсушивания среды в течение 90-100 мин при температуре 18-25 °С. Готовая среда в чашках непрозрачная зелено-желтого цвета.
Готовую среду можно использовать в течение 3 суток при температуре хранения от 2 до 25 °С (хранить в защищенном от света месте).
7.2. Взятие, посев инфицированного материала и учет результатов производят в соответствии с «Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями» (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 г., № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
7.3. Исследуемый материал тонким слоем распределить шпателем по поверхности чашек Петри с Висмут-сульфит-ГРМ агаром (при необходимости сделать разведения). Инкубировать при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч.
-
РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов проводят визуально через 24-48 ч инкубации при температуре
(37±1) °С. Сальмонеллы, продуцирующие сероводород, на Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск образуют круглые или полиморфные, черные или черные с коричневым или темно-зеленым оттенком колонии, обладающие часто металлическим блеском, и окрашиванием среды под колониями в черный цвет; сальмонеллы, не продуцирующие сероводород, образуют круглые зеленые или темно-зеленые колонии. Колонии эшерихий круглые, зеленовато-коричневые.
Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее, чем в трех повторностях.
-
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.
Срок годности – 3 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
По вопросам, касающимся качества Висмут-сульфит-ГРМ агара в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.
Скачать Инструкцию
Скачать РУ
Скачать прайс-лист
Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск
Описание
Набор реагентов Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-сульфит агар) предназначен для выделения сальмонелл из исследуемого материала.
Форма выпуска
Выпускается в полиэтиленовых банках по 150, 200,250 г а также по 200 г в пакетах их трехслойной ламинированной бумаги с инструкцией по применению, паспорт (в комплекте поставки).
Назначение
Набор реагентов Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут- сульфит агар) предназначен для выделения сальмонелл из исследуемого материала. Изделие для диагностики ин витро. Функциональное назначение — вспомогательное средство в диагностике.
Характеристика набора
Принцип метода — визуальное обнаружение сальмонелл, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.
Состав набора.
Набор реагентов Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут- сульфит агар) представляет собой смесь сухих компонентов из расчета г/л:
Панкреатический гидролизат кильки — 27,1
Агар микробиологический — 12,4±2,5
Экстракт кормовых дрожжей — 0,64
Д (+)-глюкоза — 4,5
Висмут лимоннокислый — 1,7
Натрия сульфит безводный — 2,55
Соль Мора — 1,15
Динатрий фосфат обезвоженный — 2,55
Бриллиантовый зеленый — 0,016
Сода кальцинированная — 0,6
Натрия хлорид — 2,5
Набор реагентов «Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут- сульфит агар)» выпускается в полиэтиленовых банках по 150, 200,250 г а также по 200 г в пакетах их трехслойной ламинированной бумаги с инструкцией по применению, паспорт (в комплекте поставки). Ремонту и обслуживанию не подлежит.
Чувствительность среды, скорость роста и стабильность основных биологических свойств микроорганизмов. «Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-
сульфит агар)» должна обеспечивать рост тест-штаммов Salmonella typhi Н 901 ГДР/ГИСК, Salmonella typhimurium 79, Salmonella london 3496, Salmonella paratyphi A 225, Salmonella gallinarum 665 и Salmonella typhi «bismuth» на всех засеянных чашках Петри при посеве по ОД мл разбавленной стерильным 0,9 % раствором натрия хлорида в соотношении 1:1 микробной взвеси культуры каждого тест-штамма из разведения 10″6
не позднее 48 ч инкубации при температуре (37+1) °С. Тест-штаммы S. typhi Н 901 ГДР/ГИСК, S. typhimurium 19 и S. london 3496 образуют черные круглые диаметром 1,5-3,0 мм колонии с блестящей зоной вокруг них; среда под колониями окрашивается в черный цвет.
S. paratyphi А 225 образует зеленые круглые с темным центром колонии диаметром 1,0-2,5 мм; S. gallinarum 665 — зеленые круглые колонии диаметром 0,8-1,2 мм; S. typhi «bismuth» — полиморфные черные колонии диаметром 1,0-2,0 мм с окрашиванием среды под ними в черный цвет.
Дифференцирующие свойства среды. Питательная среда должна обеспечивать на всех засеянных чашках четкую дифференциацию по характеру роста тест-штамма S. typhimurium 19 от Е. coli 3912/41 (055:К59) при посеве по 0,1 мл микробной смеси указанных штаммов через 44-48 ч инкубации при температуре (37+1) °С.
Тест-штамм Е. coli 3912/41 (055:К59) образует зеленовато-коричневые колонии диаметром 0,5-1,5 мм без окрашивания среды в отличие от черных колоний S.typhimurium 79 с блестящей зоной вокруг них и окрашиванием среды под колониями в черный цвет.
Показатель ингибиции. Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-сульфит агар) должна полностью подавлять на всех засеянных чашках рост тест- штамма Staphylococcus aureus Wood-46 при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10′1, Klebsiella rhino skier omatis NCTC 5046 из разведения 10″5 через 44-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С. При посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10′6 тест-штамма Proteus vulgaris НХ 19 через 44-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С на всех засеянных чашках должно быть подавлено роение (рост Р. vulgaris НХ 19 в виде зеленовато-коричневых колоний диаметром 2,5-3,5 мм). Рост тест- штамма Е. coli 3912/41 (055:К59) на среде должен подавляться не менее чем в 100 раз по отношению к числу колоний на питательном агаре при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10″4*.
* Примечание: при отсутствии роста Е. coli 3912/41 (055:К59) из разведения 10″4
используют данные, полученные при посеве штамма из разведения 10″3.
Меры предосторожности
Потенциальный риск применения изделия — класс 1.
При работе необходимо соблюдать правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности», СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней»; СП 1.3.2518-09 «Дополнения и изменения № 1 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней; СП 1.3.2885-11 «Дополнения и изменения № 2 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).
Утилизация изделий, пришедших в негодность, с истекшим сроком годности и изделий после контакта с биологическими образцами осуществляется в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
Оборудование и реагенты
Термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С;
Автоклав;
Пробирки стеклянные (ГОСТ 25336-82);
Чашки Петри (ГОСТ 23932-90);
Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72);
Спиртовка (ГОСТ 25336-82);
0,9 % раствор натрия хлорида (ГОСТ 4233-77);
Пипетки (ГОСТ 29227-91);
Воронка (ГОСТ 25336-82);
Анализируемые пробы
Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.
Проведение анализа
Подготовка питательной среды.
Висмут-сульфит агар, в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят при перемешивании до полного расплавления агара 5 мин, охлаждают до температуры 45-50 °С, взбалтывают, разливают в нестерильные чашки Петри слоем 4-5 мм, оставляют их открытыми в течение 80-100 мин при температуре 18-25 °С для застывания и подсушивания среды. Три чашки со средой выдерживают при температуре (37±1) °С в течение 44-48 ч (контроль на стерильность). Готовая среда в чашках непрозрачная, зеленого цвета.
Посев исследуемого материала проводить согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико- диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
Регистрация результатов
Регистрацию результатов анализа проводят визуально, по наличию роста колоний.
Учет результатов
Учет результатов производят согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М., 1984 г).
Условия хранения и эксплуатация набора
Набор реагентов «Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут- сульфит агар)» необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 до 25 °С.
Транспортирование должно проводиться при температуре от 2 до 25 °С всеми видами крытого транспорта.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей Инструкции по применению.
|
Bismuth Sulphite Agar |
М027 |
| Bismuth Sulphite Agar Modified Висмут-сульфитный агар модифицированный |
M1004 |
Эта среда рекомендуется для селективного выделения и предварительной идентификации Salmonella typhi и других сальмонелл из патологического материала, сточных вод, пищевых продуктов, воды и другого исследуемого материала.
|
|
Рост Salmonella серовара Enteritidis |
Состав**:
|
Ингредиенты |
М027 |
М1004 |
|
Пептический перевар животной ткани |
10,00 |
5,00 |
|
Мясной экстракт |
5,00 |
5,00 |
|
Глюкоза |
5,00 |
5,00 |
|
Натрия гидрофосфат |
4,00 |
4,00 |
|
Железа сульфат |
0,30 |
0,30 |
|
Висмута сульфит (индикатор) |
8,00 |
8,00 |
|
Бриллиантовый зеленый |
0,025 |
0,016 |
|
Агар-агар |
20,00 |
12,70 |
|
Конечное значение рН (при 25°С) |
7,7 ± 0,2 |
7,6 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 52,33 г порошка М027 или 40,0 г порошка М1004 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. НЕ СТЕРИЛИЗОВАТЬ АВТОКЛАВИРОВАНИЕМ И НЕ ПЕРЕГРЕВАТЬ, т.к. это может привести к потере селективности среды.
Селективные свойства среду обеспечивают, главным образом, частицы сульфита висмута, которые надо равномерно распределить перед розливом среды в чашки Петри.
Принцип и оценка результата:
Висмут-сульфитный агар рекомендован многими профессионалами (1, 2, 3, 4, 5, 6) для селективного выделения и предварительной идентификации Salmonella typhi и других сальмонелл из патологического материала, сточных вод, пищевых продуктов, воды и другого исследуемого материала.
Бриллиантовый зеленый и сульфит висмута подавляют рост грамположительных и кишечных грамотрицательных микроорганизмов. Salmonella typhi, Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium обычно образуют на этой среде черные колонии с металлическим блеском, окруженные зоной почернения в результате продукции сероводорода и восстановления сульфита до сульфида железа, имеющего черный цвет. Salmonella paratyphi A образует светло-зеленые колонии. Ввиду высокой селективности среды на нее наносят большой инокулюм (грамположительные и колиформные микроорганизмы активно подавляются). На данной среде может подавляться рост и некоторых сальмонелл, поэтому она не должна быть единственной селективной средой в ходе исследования. На висмут-сульфитном агаре подавляется рост шигелл и таких сальмонелл, как S.sendai, S.berta, S.gallinarum, S.abortus-equi.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий зеленовато-желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному агаровому гелю (М027) или 1,27%-ному агаровому гелю (М1004).
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет зеленовато-желтую окраску с хлопьевидным преципитатом, опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор М027 (5,23% вес/об) имеет рН 7,7 ± 0,2; водный раствор М1004 (4,0% вес/об) имеет рН 7,6 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35°С.
|
Штамм микроорганизмов (АТСС) |
Рост |
Цвет колоний |
|
Salmonella enteritidis (13076) |
Обильный |
Черные |
|
Salmonella typhi (19430) |
Обильный |
Черные |
|
Enterobacter aerogenes (13048) |
Слабый |
Коричневые |
|
Escherichia coli (25922) |
Слабый |
Коричневые |
|
Shigella flexneri (12022) |
Слабый |
Коричневые |
|
Enterococcus faecalis (29212) |
Подавляется |
– |
Примечание: * в зависимости от густоты инокулюма
Ссылки:
1. Washington J. A., 1981, Laboratory Procedures in Clinical Microbiology, Springer — verlag, New York.
2. Greenberg A.E., Clesceri L.S. and Eaton A.D (Eds.), 1992, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 18th ed., APHA, Washington D.C.,
3. Bacteriological Analytical Manual, 1980, U.S. Food and Drug Administration (FDA), Washington, D.C.
4. Lenette E.H. et al, 1980, Manual of Clinical Microbiology, 3rd ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C.
5. Vanderzant C. and Splittstoesser D. (Eds.), 1992, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 3rd ed., APHA, Washington, D.C.
6. Indian Pharmacopoeia, 1996, Ministry of Health and Family Welfare, Govt. of India, Volume 2.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С, но не более 2 дней, после чего она зеленеет и может подавлять рост некоторых сальмонелл.
Висмут-сульфит агар
Цена за упаковку 250 г.
- Описание
Описание
Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-сульфит агар)
СРОК ГОДНОСТИ3 года.
ПРОИЗВОДИТЕЛЬФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России. Адрес производства: Россия, 367025, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Леваневского, д. 24.
Форма выпуска
Выпускается в полиэтиленовых банках по 200, 400 г, а также по 200 г в пакетах из трехслойной ламинированной бумаги.
Состав
Набор реагентов Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-сульфит агар) представляет собой смесь сухих компонентов из расчета г/л: Панкреатический гидролизат кильки 27,1, Агар микробиологический 12,4±2,5, Экстракт кормовых дрожжей 0,64, Д (+)-глюкоза 4,5, Висмут лимоннокислый 1,7, Натрия сульфит безводный 2,55, Соль Мора 1,15, Динатрий фосфат обезвоженный 2,55, Бриллиантовый зеленый 0,016, Сода кальцинированная 0,6, Натрия хлорид 2,5.
Режим дозирования и способ применения
Висмут-сульфит агар, в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят при перемешивании до полного расплавления агара 5 мин, охлаждают до температуры 45-50 °С, взбалтывают, разливают в нестерильные чашки Петри слоем 4-5 мм, оставляют их открытыми в течение 80-100 мин при температуре 18-25 °С для застывания и подсушивания среды. Три чашки со средой выдерживают при температуре (37±1) °С в течение 44-48 ч (контроль на стерильность). Готовая среда в чашках непрозрачная, зеленого цвета.
Меры предосторожности при применении
Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).
Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-сульфит-ГРМ-агар) 250 г.
-
1205.54 руб.
- Описание
- Отзывов (0)
Предназначена для выделения сальмонелл из исследуемого материала. Представляет собой смесь сухих компонентов.
Состав: панкреатический гидролизат кильки, агар микробиологический, экстракт кормовых дрожжей, Д(+)-глюкоза, висмут лимоннокислый, натрия сульфит безводный, соль Мора, динатрий фосфат обезвоженный, бриллиантовый зеленый, сода кальцинированная, натрия хлорид.
Приготовление: висмут-сульфит агар, в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят при перемешивании до полного расплавления агара 5 мин, охлаждают до температуры 45-50°С, взбалтывают, разливают в нестерильные чашки Петри слоем 4-5 мм, оставляют их открытыми в течение 80-100 мин при температуре 18-25°С для застывания и подсушивания среды. Три чашки со средой выдерживают при температуре (37±1)°С в течение 44-48 ч (контроль на стерильность). Готовая среда в чашках непрозрачная, зеленого цвета.
Принцип действия: посев исследуемого материала проводить согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М.,1984г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико- диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
Проведение анализа: учет результатов производят согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М„ 1984 г).