Реактив эрлиха для определения индола инструкция

Реактив Эрлиха (определение индола)

Реакция Эрлиха применяется для дифференциальной микробиологической диагностики: образуют индол (реакция Эрлиха положительная) Escherichia coli, Proteus, холероподобные вибрионы и некоторые другие; не образуют индола (реакция Эрлиха отрицательная) сальмонеллы (включая бактерии брюшного тифа и паратифов), шигеллы и многие др.
Индол, реагируя с диметиламинобензальдегидом, образует соединение, окрашенное в красный цвет. Реакцию проводят следующим образом: в бульонную культуру бактерий вносят 1—2 мл эфира, сильно встряхивают и осторожно по стенкам пробирки приливают 2 мл раствора № 1 (4 г р-диметиламинобензальдегида + 380 мл 96% этилового спирта + 80 мл концентрированной соляной кислоты) и 2 мл раствора № 2 (насыщенный раствор персульфата калия). В том случае, если не позднее чем через 5 минут эфирный слой краснеет, реакция считается положительной.

Оформить заказ

При заказе от 50 000 руб. — индивидуальные скидки!

Как купить этот товар у нас?

Для приобретения данного товара оформите заявку нажав кнопку «заказать» рядом с наименованием товара. После этого Вы автоматически попадете на страницу оформления заказа. Процедура оформления заказа предельно проста и заключается в заполнении необходимых контактных данных. Регистрация на сайте при этом не требуется. После оформления заказа наши менеджеры свяжутся с вами для уточнения информации по заказу.

Если рядом с ценой товара отсутствует кнопка «заказать», значит в данный момент его нет в наличии. В этом случае Вы можете узнать об ожидаемом его поступлении у менеджера по телефону или по электронной почте.

Обратите ВНИМАНИЕ, что производитель может внести изменения в комплектацию, технические характеристики и внешний вид товара без уведомления.

Информация о доставке

Представленный на этой странице продукт можно приобрести в нашей компании с доставкой по всей России. Доставка по Санкт-Петербургу осуществляется курьером, в другие города и населенные пункты заказы высылаем транспортными компаниями «Автотрейдинг» и «Деловые Линии», так же возможна отправка другими транспортными компаниями на ваш выбор.

При заказе товара в Санкт-Петербурге есть возможность самостоятельного вывоза товара со склада нашей компании. Адреса и условия получения заказа вы можете уточнить у менеджеров нашей компании.

Информация об оплате

Оплата продукции осуществляется в виде 100 % предоплаты на расчетный счет нашей компании, согласно выставленного счета.

Информация о сертификации.

Вся продукция поставляемая нашей компанией имеет все необходимые лицензии и сертификаты качества, а так же регистрационные удостоверения.

Точную стоимость и наличие продукции на складе,
уточняйте у менеджеров компании по телефону: +7 (812)  539-27-36

Индоловый тест – это биохимический процесс, который используется для выявления продуцирующего индол вещества. организм из триптофана. Триптофан – важная аминокислота, которая содержится в большинстве бактерий. ячейка белка.

Бактерии, имеющие фермент триптофаназу, будут гидролизовать триптофан в различные продукты метаболизма, такие как индол, пировиноградная кислота и аммиак. Тогда бактериальная клетка будет использовать пировиноградную кислоту и аммиак в качестве питательного вещества, а индол начнет накапливаться в среде, окружающей бактерии. Наличие индола можно определить с помощью индольного теста.

Определение индольного теста

• Индольный тест можно описать как тест, который использует биохимию на бактериальных видах для проверки их способности создавать индол путем комбинирования триптофана с классом ферментов, называемых «триптофаназой».
• Это тест качественного характера, который проверяет, как триптофан превращается в индол.
• Тест проводится как часть теста IMViC, который можно использовать для различения особей, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae.
• Это имеет решающее значение для обнаружения различных бактерий, таких как Escherichia coli Proteus, Morganella и т. д.
• Это ключевой элемент в анализе колиформ, о чем свидетельствуют многочисленные вариации теста. Он также используется в сочетании с другими тестовыми биохимическими веществами.
• Он до сих пор используется в качестве метода отделения индол-положительных EE coli от индол-отрицательных энтеробактерий или клебсиелл.
• Другая версия теста, называемая реагентом Эрлиха (с использованием этилового спирта вместо изоамилового спирта), используется в тех случаях, когда тест необходимо проводить на неферментирующих или анаэробных организмах.

Цель индольного теста

Тест на индол проверяет способность организма расщеплять аминокислоту триптофан с образованием индола. Это компонент тестов IMViC, представляющих собой серию тестов, предназначенных для дифференциации от представителей группы Enterobacteriaceae.

Принцип индольного теста

Триптофан превращается в индол путем восстановительного дезаминирования через промежуточный молекула индолпировиноградная кислота. Эта реакция катализируется ферментом триптофаназой, который помогает удалить аминогруппу (-NH2) из ​​молекулы триптофана.

Затем наличие индола можно обнаружить, добавляя реактив Ковача (4(p)-диметиламинобензальдегид) к среде, содержащей индол, образующий микроорганизм. Этот реагент Ковача образует ярко-красное соединение на поверхности среды в результате реакции с индолом. 

В точечном тесте с индолом п-диметиламинокоричный альдегид (ДМАКА) соединяется с индолом на матрице фильтровальной бумаги и образует соединение от синего до сине-зеленого цвета.

Реагенты, используемые в индольном тесте

Используемые реагенты

• Для выборочного теста 5% p-диметиламинобензальдегид или 1% pдиметиламинокоричный альдегид получают в 10% (об./об.) концентрированной HCl.
• Для пробирочного метода реактив Ковача используется для аэробных организмов, а реактив Эрлиха для анаэробов и слабых продуцентов индола.

реактив Ковача

• Среда, используемая с этим реагентом, представляет собой бульон, содержащий триптофан, подвижно-индол-орнитиновый агар или сульфид-индол-подвижный агар (SIM).

реактив Эрлиха

• Среду используют с реактивом Эрлиха — сердечный настой или анаэробную среду с триптофаном.

Требуются другие расходные материалы

• Стерильная петля, тампон или палочка для инокуляции
• Фильтровальная бумага (по желанию)

Методика индоловой пробы

Существуют две разные процедуры индольного теста;

1. Обычный пробирочный метод для теста на индол.
2. Точечный индольный тест

Обычный пробирочный метод для теста на индол

Требование

• Питательная бульонная культура тест-организма ( E coli , enterobacter aerogenes , P. vulgaris )
• пробирки
• 1% триптоновый бульон
• Реактив Ковача (4(п)-диметиламинобензальдегид)
• Прививочные петли

Читайте также: Противовирусный препарат – способ действия

Приготовление 1% триптонового бульона: Растворить 10 г пептона в 1 л дистиллированной воды и затем стерилизовать в автоклаве.

Реагент Индол Ковач: Смешайте 50.0 г п-диметиламинобензальдегида с 250.0 мл 37%-ной соляной кислоты и 750.0 мл амилового спирта.

Процедура обычного трубочного метода

1. Прежде всего, берут две стерилизованные пробирки, а затем добавляют в каждую пробирку по 5 мл питательного бульона.
2. После этого в одну пробирку добавляют селективный микроорганизм, а другую оставляют пустой.
3. Пометьте первую пробирку названием организма, а вторую пробирку пометьте как контрольную.
4. После этого все эти пробирки инкубируют при 35°С в течение 24-28 часов.
5. После инкубации в каждую пробирку, включая контроль, вносят по 5 мл реактива Ковача.
6. Держите их всех в статическом состоянии, чтобы дать им возможность реагировать.

Результат обычного метода пробирки для теста на индол

1. Положительный тест на индол: Если в течение 30 секунд цвет меняется с розового на красный («вишнево-красное кольцо»), это свидетельствует о положительном результате. Это означает, что подопытный организм вырабатывает в среде индол.
2. Отрицательный тест на индол: Если не происходит изменения цвета, это указывает на отрицательный результат. Тестовый организм не обладает способностью к продукции индола.

Точечный индольный тест

Этот тест выполняют только для обнаружения присутствия фермента триптофаназы. Фермент триптофаназа превращает триптофан в индол, который затем реагирует с п-диметиламинокоричным альдегидом (ДМАКА) и образует сине-зеленое соединение. 

Требования к точечному тесту на индол:

• Индольный точечный реагент
• Фильтровальная бумага

Состав реагента индолового пятна: Смешайте 10.0 г п-диметиламинокоричного альдегида (ДМАКА) со 100.0 мл 37%-ной соляной кислоты и 900.0 мл амилового спирта.

Процедура точечного индольного теста

1. Возьмите 3-5 капель диметиламинокоричного альдегида (ДМАКА) на фильтровальную бумагу.
2. Затем переносят часть 18-24-часовой выделенной колонии с неселективной среды на пропитанную этим реагентом фильтровальную бумагу с помощью инокуляционной петли.
3. Затем наблюдайте за изменением цвета

Результат точечного индольного теста:

• Положительный тест на индол: Если в течение 2-3 минут он приобретает синий цвет, это указывает на положительный результат, что означает, что микроорганизм обладает способностью вырабатывать индол. 
• Отрицательный тест на индол: Если изменение цвета не происходит, это указывает на отрицательный результат, что означает, что испытуемый организм не способен вырабатывать индол.

Использование индольного теста

1. Используется при очистке сточных вод для обнаружения колиформных бактерий.
2. Используется для дифференциации видов Klebsiella. Например, Klebsiella oxytoca показывает положительный результат на индол, а Klebsiella pneumoniae показывает отрицательный результат на индол в тесте на индол.
3. Используется для дифференциации между видами Citrobacter. Например, Citrobacter Koseri показывает положительный результат на индол, а Citrobacter freundii показывает отрицательный результат на индол в тесте на индол.
4. Используется для дифференциации видов Proteus. Например, Proteus Vulgaris показывает положительный результат на индол, а Proteus mirabilis показывает отрицательный результат на индол в тесте на индол.

Контроль качества для теста на индол

• Не используйте средства на основе бензальдегида (в том числе средства Ковача и Эрлиха), если цвет не светло-желтый.
• Выполняйте контроль качества каждой новой партии реагентов перед их использованием. Контроль качества реагентов собственного производства, поскольку они могут разлагаться, особенно если их не хранят при температуре 4 градуса Цельсия. Воздержитесь от использования, если реакция становится слабой.
• микроорганизмы
  • Escherichia coli ATCC 25922 — положительный на индол
  • Синегнойной палочки ATCC 27853 — индол отрицательный
  • Для реактива Эрлиха для использования с анаэробными микроорганизмами
    • Porphyromonas asaccharolytica ATCC 25260 — положительный на индол
    • Bacteroides fragilis ATCC 25285 — отрицательный индол

Ограничения индольного теста

• Индольные тесты можно использовать в качестве инструмента для определения различий между грамположительными и грамотрицательными микроорганизмами. Для подтверждения личности микроорганизма предлагается дополнительное биохимическое тестирование с использованием чистых культур.
• Пробирочные тесты более точны в обнаружении индола, чем точечные тесты.
• Если вы проводите выборочный тест, вместо реагента для выборочного теста можно использовать реагент Kovacs Indole Reagent. Однако индольный реагент Ковача в случае использования в качестве реагента для точечного теста не так чувствителен к обнаружению индола, как точечный индоловый реагент (DMACA).
• Kovacs Indole Reagent не рекомендуется использовать в сочетании с анаэробными бактериями. Его индольный точечный реагент (DMACA) подходит для использования с анаэробами.
• Было доказано, что пептоны различаются по своей способности использоваться для тестирования индола, среды, используемые для определения индола, должны быть протестированы с использованием признанных позитивно и негативно настроенных организмов, чтобы подтвердить их пригодность.
• Не рекомендуется использовать глюкозосодержащие среды для тестирования индолов из-за образования конечных кислотных продуктов, которые, как было установлено, снижают образование индолов. Агар Мюллера-Хинтона также не следует использовать в этом тесте, поскольку триптофан удаляется в процессе кислотного гидролиза казеина.
• Среды, содержащие краситель, такие как MacConkey и EMB, не являются подходящими источниками инокулята из-за возможного переноса красителя и последующего вмешательства в процесс обработки индольного цвета.
• Известно, что индол-положительные колонии вызывают появление индол-отрицательных колоний как ложноположительные из-за распространения индола через среду. Чтобы предотвратить ложноположительные результаты, выберите колонии с различной морфологией, которые имеют расстояние не менее 5 мм, чтобы можно было проводить тесты на индол.

Список индол-положительных и отрицательных организмов

Индол-положительные бактерии

К бактериям с положительной пробой на способность отщеплять индол от триптофана относятся: Aeromonas hydrophila, Aeromonas punctata, Bacillus Alvei, Edwardsiella Sp., Escherichia coli, Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae, Klebsiella Oxytoca Proteus sp. (не P. mirabilis и P. penneri), Plesiomonas shigelloides, Pasteurella multocida, Pasteurella pneumotropica, Enterococcus faecalis Vibrio sp. и лактобациллы реутери.

Индол-отрицательные бактерии

Бактерии, дающие отрицательный результат на индольный тест: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida и Alcaligenes sp. Большинство видов Bacillus, Bordetella sp., Enterobacter sp., большинство Haemophilus sp. Наиболее известны Klebsiella isp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica, Pasteurella ureae и Proteus mirabilis. P. penneri Pseudomonas Sp., Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. и Rhizobium sp.

From Wikipedia, the free encyclopedia

Ehrlich’s reagent or Ehrlich reagent is a reagent containing p-dimethylaminobenzaldehyde (DMAB) and thus can act as an indicator to presumptively identify indoles and urobilinogen. Several Ehrlich tests use the reagent in a medical test; some are drug tests and others contribute to diagnosis of various diseases or adverse drug reactions. It is named after Nobel Prize winner Paul Ehrlich who used it to distinguish typhoid from simple diarrhoea.

The Ehrlich reagent works by binding to the C2 position of two indole moieties to form a resonance stabilised carbenium ion compound.^[1]

Medical testing[edit]

Ehrlich reagent can be used to detect urobilinogen, which can indicate jaundice or other liver-related issues.

A very common Ehrlich test is a simple spot test to identify possible psychoactive compounds such as tryptamines (e.g. DMT) and lysergamides (e.g. LSD). It gives a negative test-result for 25I-NBOMe and many other non-indole-related psychoactives. The reagent will also give a positive result for opium, because of the presence of tryptophan in natural opium.^[3]

Pyridoxine, present in vitamin supplements, can give positive results to the Ehrlich test, showing a pink colour change.^[4]

Preparation[edit]

The reagent is prepared by dissolving 0.5^[5]–2.0 g of p–dimethylaminobenzaldehyde (DMAB) in 50 mL of 95% ethanol and 50 mL of concentrated hydrochloric acid^[6][7] and is best used when fresh. Other alcohols, such as 1-propanol, can also be used as well.^[8]

The Ehrlich reagent is similar to a number of other indole tests:

• The van Urk reagent, which uses 0.125 g of p-DMAB, 0.2 mL of ferric chloride solution (25 g/mL) in 100 mL of 65% sulfuric acid.^[9][10][11] This is sometimes referred to as the Hofmann reagent or p-DMAB-TS (Test Solution) and gives slightly different colours with different indoles.
• The Renz and Loew reagent, which uses p-dimethylaminocinnamaldehyde and may also be used for the detection of flavonoids.
• The «improved hallucinogen reagent», which uses a 1:1 solution of 5% DMAB in concentrated phosphoric acid (specific gravity 1.45) to methanol.^[3][12]

See also[edit]

• Drug checking
• Other alkaloid spot tests:
  • Froehde reagent
  • Indole test
  • Kovac’s reagent, similar but uses isoamyl alcohol
  • Liebermann reagent
  • Marquis reagent

References[edit]