20.07.2021
Важным условием получения достоверного результата исследования методом ПЦР на COVID–19 является правильный забор, хранение и своевременная доставка клинического материала в лабораторию.
Входными воротами для вируса SARS-CoV-2 являются верхние дыхательные пути. После попадания на слизистые носоглотки и ротоглотки вирус начинает размножаться в эпителиальных клетках. Поэтому в конце инкубационного периода и в первые дни клинических проявлений наиболее информативными являются мазки именно из этих областей.
Все процедуры по забору клинического материала выполняет медработник с использованием средств индивидуальной защиты.
ЗАБОР МАТЕРИАЛА
- Мазки берут двумя сухими стерильными зондами. Для этого используют пластиковые зонды с синтетическим тампоном. Нельзя пользоваться зондом на деревянной основе с хлопковым тампоном, так как его применение может ингибировать реакцию и привести к ложноотрицательным результатам.
- Первый зонд вводят поочередно в обе полости носа пациента на глубину 2 см. Затем его направляют слегка вниз и вводят его в нижний носовой ход, прижимают наружную стенку носа и вращательным движением тщательно снимают слущенный эпителий. Вторым зондом берут мазок с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки, не касаясь корня языка.
- Мазок из носоглотки и мазок из ротоглотки помещают в одну пробирку с транспортной средой для большей концентрации вируса.
- Свободные концы зондов отламывают и герметично закрывают пробирку.
Взятый материал в течение 1-4 часов доставляют в лабораторию с соблюдением холодовой цепи. Допускается хранение биологического материала в течение 24 ч при температуре 2–8°С, более длительно – при температуре не выше минус 20° С. При нарушении сроков хранения и условий транспортировки генетический материал возбудителя может разрушаться, что приведет к ложноотрицательным результатам.
Достоверность результата ПЦР-теста зависит не только от соблюдения правил забора, но и от правильной подготовки к сдаче мазков со стороны пациента:
- мазок необходимо сдавать натощак или не ранее чем через 3 часа после последнего приёма воды и пищи;
- за 3 часа до взятия мазка нельзя курить, чистить зубы, использовать спрей-освежитель для ротовой полости или жевательную резинку;
- не менее чем за 3 часа до взятия мазка нельзя использовать лекарственные средства местного применения (капли, спреи, мази, рассасывающиеся таблетки, леденцы или пастилки).
Что будет, если есть или пить перед сдачей мазков для ПЦР-теста?
Коронавирус SARS-Cov-2 живет внутри эпителиальных клеток. Для ПЦР-исследования важно получить мазок с достаточным количеством инфицированных клеток. В момент проглатывания еды эпителиальные клетки механически слущиваются пищевым комком с поверхности слизистой оболочки. Если взять мазок сразу после еды, в пробирку может попасть недостаточное количество инфицированных клеток. В этом случае пациент может получить ложноотрицательный результат. То же касается питья. Вода смывает с поверхности миндалин, задней стенки глотки инфицированные клетки.
Можно ли пользоваться лекарственными средствами для носа и горла (капли, спреи, антисептики) перед сдачей мазков?
Перед взятием мазков нельзя использовать лекарственные средства для местного применения (капли, спреи и др). После их применения количество вируса на слизистой снижается и увеличивается вероятность получения ложноотрицательных результатов ПЦР-теста.
Почему нельзя чистить зубы перед сдачей ПЦР-теста?
Применение любых очищающих средств для полости рта снижает количество вируса в получаемом мазке. Зубная паста может содержать антисептические компоненты. Попадание ее остатков в пробирку с мазком может ингибировать реакцию, что приведет к недостоверным результатам.
О.А. Колесникова, биолог лаборатории вирусологических исследований и диагностики ВИЧ/СПИД
Важным моментом, определяющим точность проведения исследований на COVID-19 является правильный забор материала для проведения исследования. При неправильном заборе материала, его неправильном хранении или транспортировке, высок риск ложноотрицательных результатов, что может привести к ошибочной диагностике и отказу от проведения противоэпидемических мероприятий там, где они показаны.
В качестве первоначального исследования на COVID-19 рекомендуется забор и оценка мазка из верхних дыхательных путей (носоглотки (НГ)). Если произведен забор ротоглоточного мазка (РГ), он помещается в одну пробирку вместе с мазком из НГ; при этом мазок из РГ имеет меньшую значимость, чем мазок из НГ.
Процедуре забора мокроты подлежат только пациенты с влажным кашлем. Стимуляция образования мокроты не рекомендуется. Если имеются образцы из нижних дыхательных путей, они также подлежат тестированию.
При наличии клинических показаний (т.е. если пациенту проводится искусственная вентиляция лёгких), производится забор и исследование материала из нижних дыхательных путей либо производится забор бронхоальвеолярных выделений. В этом случае забор материала проводится в отделениях интенсивной терапии и реанимации. У интубированных пациентов имеет смысл проводить забор эндотрахеального аспирата или образцов, полученных в ходе бронхоальвеолярного лаважа, для проведения не только анализов на COVID-19, но и других анализов: ПЦР панель атипичных возбудителей (микоплазмы, хламидии, легионелла), панель респираторных вирусов. Также имеет смысл провести другие исследования, если этиология тяжелой пневмонии не определена: определение антигена легионелл в моче, титр антител к микоплазме, посев на туберкулез, исследования на оппортунистические патогены у больных с ослабленным иммунитетом.
Забор образцов должен быть произведен незамедлительно, как только был установлено подозрение на COVID-19, вне зависимости от того, когда появились симптомы. В момент забора образцов должен соблюдаться санитарно-эпидемический режим. Персонал должен быть обучен технике взятия мазков.
Образцы, взятые из нижних дыхательных путей
Бронхоальвеолярный лаваж, трахеальный аспират
Должно быть собрано от 2 до 3 мл образца в стерильную, герметичную емкость для забора мокроты, которая закручивается крышкой с резьбой, либо в стерильный сухой контейнер.
Мокрота
Пациенту следует прополоскать рот водой и после глубокого кашля откашлянуть мокроту непосредственно в стерильную, герметичную емкость для забора мокроты, которая закручивается крышкой с резьбой, либо в стерильный сухой контейнер.
Образцы, взятые из верхних дыхательных путей
Мазки из носо-/ ротоглотки
Для забора используется зонд-тампон исключительно из синтетического волокна. Не должны использоваться зонды из альгината кальция или зонды на деревянном стержне, оба из которых могут инактивировать некоторые вирусы и ингибировать полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Зонды должны быть незамедлительно помещены в стерильные пробирки, содержащие 2–3 мл вирусной транспортной среды. Как правило, рекомендуют осуществлять забор образцов только из НГ. Когда забор производится также из РГ, он должен быть помещен при заборе вместе с мазком из НГ в одну пробирку.
Для забора образца из НГ, зонд должен быть введен в ноздрю параллельно нёбу на глубину равную расстоянию от ноздри до отверстия наружного уха. Для того, чтобы выделения впитались, зонд должен быть оставлен в месте введения на несколько секунд. Затем он должен быть медленно извлечен. При извлечении зонда сотрудник, проводящий забор, должен его вращать. При заборе образца из РГ (т.е. мазок из зева) задняя часть глотки должна быть обработана тампоном, при этом следует избегать соприкосновения с языком.
Смыв/аспират из носоглотки / аспират из полости носа
Должно быть собрано от 2 до 3 мл образца в стерильную, герметичную емкость для забора мокроты, которая закрывается крышкой, которая закручивается с помощью сеющийся на ней резьбы, либо в стерильный сухой контейнер.
Условия хранения
Образцы подлежат хранению при температуре от 2 до 8°C в течение не более 72 часов с момента забора. В случае перенесения сроков проведения исследования или доставки образцов, образцы подлежат хранению при температуре –70°C и ниже.
Доставка
Упаковка, доставка и транспортировка образцов производится в соответствии с правилами перевозки опасных грузов, разработанных для каждого конкретного государства. Образцы подлежат хранению при температуре от 2 до 8°C в течение не более 72 часов с момента забора и доставляются на следующий день в лабораторию изотермическом контейнере. Образцы, подвергнутые заморозке при температуре –70°C, должны быть помещены в контейнер с сухим льдом и доставлены на следующий день в лабораторию.
Непременным условием успешного выделения вирусов является правильный сбор клинических материалов и их своевременная доставка в лабораторию!
Выбор времени забора клинического материала очень важен, так как наиболее высокое содержание вируса в дыхательных органах человека регистрируется в течение первых 3 дней после появления признаков заболевания.
Образцы должны быть собраны:
- от больных на 1, 3, 10 день с момента госпитализации;
- от лиц, за которыми установлено медицинское наблюдение, по прибытию и на 10 день наблюдения!
Все процедуры по забору клинического материала выполняет медицинский персонал с использованием средств индивидуальной защиты.
Для исследования забирают следующие виды клинического материала:
|
У лиц с признаками заболевания |
У лиц, находящихся под медицинским наблюдением |
|
1. Мазок из носа и ротоглотки 2. Цельная кровь/сыворотка крови |
1. Мазок из носа и ротоглотки 2. Сыворотка крови |
ЗАБОР МАТЕРИАЛА ИЗ РОТОГЛОТКИ
- Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности небных дужек, миндалин и задней стенки ротоглотки, избегая поверхности языка и слизистой щек.
- Рабочую часть зонда с ватным тампоном помещают в стерильную одноразовую пробирку с вирусологической транспортной среды.
- Конец зонда отламывают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки.
- Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
ЗАБОР МАТЕРИАЛА ИЗ ПОЛОСТИ НОСА
- Мазки берут сухими стерильными зондами.
- Зонд вводят легким движением по наружной стенке полости носа на глубину 2-3 см до нижней носовой раковины.
- Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, и удаляют вдоль наружной стенки полости носа, производя вращательные движения.
ХРАНЕНИЕ МАТЕРИАЛА
При температуре от +4°С – не более 5 суток.
УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ МАТЕРИАЛА
В специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе при температуре 0-4С в течение 6-8 часов.
1.Крышку пробирки с носоглоточным смывом (одноразовые пластиковые с закручивающейся крышкой) герметизируют и маркируют (первичный контейнер).
Пробирки помещают в плотную полиэтиленовую упаковку (с замком), подходящего размера наполненную ватой, которая должна быть герметично закрыта (заклеена или запаяна) (пробирку размещают вертикально).
Пробирки с материалом от разных пациентов упаковываются в индивидуальные пакеты с замком во избежание перекрестной контаминации!
- Герметично закрытые упаковки помещают в герметично закрывающийся металлический/пластиковый контейнер для транспортировки биологического материала (вторичный контейнер).
- Контейнер помещают в пенопластовый термоконтейнер или сумку-холодильник с охлаждающими термоэлементами (третичный контейнер).
- Кровь отбирают в пробирку со средой ЭДТА.