Антиген сапной цветной для пластинчатой реакции агглютинации
Состав
Антиген сапной цветной для пластинчатой реакции агглютинации состоит из инактивированной нагреванием культуры Burkholderia mallei, окрашенной бенгальским розовым и суспензированной в молочнокислом буферном разбавителе.
Назначение
Препарат предназначен для серологической экспресс–диагностики сапа в пластинчатой реакции агглютинации.
Применение
Антиген используется в соответствии с инструкцией по применению.
Форма выпуска
Препарат расфасовывают во флаконы вместимостью 10 см3 по 333 дозы (10 см3). В коробке 10 флаконов.
Хранение
Срок хранения – 2 года с даты выпуска. Препарат хранят и транспортируют в сухом темном месте при температуре от 2 °С до 8 °С. Допускается транспортирование антигена в упаковке организации-производителя при температуре не выше 25 °С в течение не более 15 суток.
Руководитель:
Рыжов Михаил Викторович
8 909 239 00 88
Коммерческий директор:
Прокопов Дмитрий
Александрович
8 905 158 75 00
Белгородский регион
Тарасиков Виталий (КРС)
8 960 640 13 99
Липецкий регион
Москвитин Игорь
8 903 877 40 06
Воронежский регион
Свешникова Екатерина
8 950 870 40 77
Брянский регион
Михайлов Юрий
8 960 675 94 00
Прокопов Дмитрий
8 905 158 75 00
Орловский регион
Рыжов Владимир
8 951 330 33 48
Курский регион
Михайлов Юрий
8 960 675 94 00
Рыжов Михаил
8 909 239 00 88
Рязанский регион
Москвитин Игорь
8 903 877 40 06
Калужский и Тульский регионы
Рыжов Владимир
8 951 330 33 48
Технический специалист
по кормлению КРС
Абдулин Алексей 8 951 332 03 31
Специалист по кормлению ООО «ТехКорм»
Новиков Сергей 8 910 466 72 20
Независимый консультант по свиноводству и птицеводству
Василаки Игорь Андреевич 8 980 370 15 15
Использование: ветеринарная иммунология , антиген, обнаружение агглютининов в сыворотке крови садзараженных животных. Сущность изобретения: антиген для диагностики сапа представляет собой гомогенную взвесь в буферном растворе инактивированной автоклавированием культуры штамма Pseudomonus mallei № 5584, выращенной на синтетической питательной среде и окрашенной органическим красителем. Антиген предназначается для экспресс-метода исследования сыво отки крови лошадей на сап в пластинчатой реакции агглютинации. Комиссионные проверки пластинчатой РА с цветным сапным антигеном при исследовании здоровых и больных сапом лошадей показали ее эффективность и пригодность для практического применения в лабораторных и полевых условиях, возможность выявления лошадей в ранней стадии заражения, до появления состояния повышенной чувствительности к маллеину, и при хроническом течении болезни. 1 табл. качестве разбавителя — Ьуферный раствор, включающий молочную кислоту, гидроокись натрия, хлорид натрия, фенол в дистиллированной воде с рН 3,0-4,0 при следующем соотношении компонентов: Окрашенные клетки штамма Pseudomonas mallei № 5584 Молочная кислота Гидроокись натрия Хлорид натрия Фенол
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
Е ПАТЕНТНОЕ
1: (50 — 170) х х10 кл/мл
120,0 — 350,0 г
18,0 — 22,0 г.
8,0-9,0 г
4,5 — 5,5 г
До1л
1) 4920937/13
2) 16.01,91
6) 30.08,93. Бюл. № 32
1) Всесоюзный государственный научноонтрольный институт ветеринарных препаатов, Бурятский сельскохозяйственный нститут и Государственная курская биоабрика
2) А.Н.Шаров, Н.К.Букова, А.И.Климанов, И.Коровенков и B.Ï.Ñóõàíîâ
3) Всероссийский государственный науч-исследовательский институт контроля, андартизации и сертификации ветеринарх препаратов
56) Ветеринарные препараты./Под ед.Д.Ф.Осидзе. M.: Колос, 1981, с.293 — 294.
Владимиров А.А, Об агглютинации бакериальными фильтратами сапных кульур. — Мед.обозрение, 1900, с.12, Изобретение относится к ветеринарной ммунологии, в частности к антигену для бнаружения противосапных агглютининов сыворотке крови зараженных животных и иагностики болезни серологическим метоом.
Цель изобретения — повышение активости и специфичности антигена для диагнотики сапа, повышающего эффективность сследования лошадей íà can.
Это достигается тем, что антиген для иагностики сапа из клеток возбудителя соержит суспензию окрашенных клеток тамма Pseudomonas mallei N 5584, а в Ж 1837889 АЗ (Я)5 А 61 К 39/02, G 01 N 33/531 (54) АНТИГЕН ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ САПА (57) Использование: ветеринарная иммунология, антиген, обнаружение агглютининов в сыворотке крови сапзараженных животных.
Сущность изобретения: антиген для диагностики сапа представляет собой гомогенную взвесь в буферном растворе инактивированной автоклавированием культуры штамма Pseudomonus ваИе) № 5584, выращенной на синтетической питательной.среде и окрашенной органическим красителем.
Антиген предназначается для экспресс-метода исследования сыво отки крови лошадей на can в пластинчатой реакции агглютинации. Комиссионные проверки пластинчатой PA с цветным сапным антигеном при исследовании здоровых и больных сапом лошадей показали ее эффективность и пригодность для практического применения в лабораторных и полевых условиях, возможность выявления лошадей в ранней стадии заражения, до появления состояния повышенной чувствительности к маллеину, и при хроническом течении болезни, 1 табл. качестве разбавителя — Ьуферный раствор, включающий молочную кислоту, гидроокись натрия, хлорид натрия, фенол в дистиллированной воде с рН 3,0 — 4,0 при следующем соотношении компонентов:
Окрашенные клетки штамма
Pseudomonas mallei
¹ 5584
Молочная кислота
Гидроокись натрия
Хлорид натрия
Фенол
Дистиллированная вода
1837889
Антиген предназначен для применения в пластинчатой реакции агглютинации для выявления противосапных агглютининов в сыворотке крови животных и таким образом иммунодиагностики сапа.
Штамм Рзенбоаопаз mallei !Ф5584 применяется для изготовления противосапных диагностикумов (Инструкция по изготовлению и контролю антигена сапного для реакции связывания комплемента, утв. ГУВ MCX
СССР 17.08.84).
Пример 1. Для изготовления антигена культуру возбудителя сапа штамма
Pseudomonas malleI hL 5584 выращивают на синтетической питательной среде Сотона, инактивируют прогреванием при температуре 90-100 С в течение 1 ч. Бактерийную массу отделяют центрифугированием, осадок промывают дистиллированной водой, центрифугируют и суспендируют в физиологическом растворе с 0,5 (, фенола.
Определяют концентрацию клеток во вэеси в международных единицах мутности (MEM) по стеклянному единому стандарту мутности для бактерийных вэвесей, подсчитывают количество клеток в 1 мл из расчета, что 10 MEM составляют 1,65 млрд/мл, Для окрашивания, клеток используют раствор органического красителя на дистиллированной воде. Количество красителя, необходимое для окрашивания полученной массы клеток, определяют титрованием.
Взвесь клеток возбудителя Pseudomonas
maNel с установленным количеством красителя выдерживают при температуре
20-25 С, затем отделяют жидкость центрифугированием, осадок ресуспендируют s буферном растворе следующих образцов; рН 3,0-4,0 (120,0-350,0 г молочной кислоты, 18,0 — 22,0 r гидроокиси натрия, 4,5-5,5
r фенола, 8,0-9,0 хлорида натрия, дистиллированной воды до 1 л).
Образцы испытаны в PA с позитивной сапной сывороткой из расчета содержания в 1 мл 50-170 млрд микробных клеток.
Получают следующие серии антигена:
Г! родолжение таблицы
Пример 2. Для диагностики сапа одну каплю сыворотки крови животного смешивают с одной каплей антигена на белой эмалированной пластинке с лунками и учитывают реакцию в течение 4 мин. При наличии противосапных агглютининов в те15 чение 0,5-4 мин в лунке происходит образование окрашенных хлопьев агглютинина различной окраски в зависимости от используемого красителя, жидкость просветляется. Окрашенные образцы
20 антигенов испытывают в пластинчатой PA c позитивной сапной сывороткой. Во всех случаях наблюдался крупный агглютинат, соответствующего цвета с полным просветлением жидкости в лунке. При испытании образцов с негативной сывороткой реакции не наблюдалось.
Пример 3. Проводят проверку видо.вой специфичности антигена I, И и И!серий испытанием его с сывороткой крови 420
30 лошадей благополучных по сапу хозяйств разных районов страны, а также с гипериммунными поливалентными сыворотками разных серогрупп и вариантов: Π— и Н-сальмонеллеэными, лептоспирозными, О-коли сывооотками, сибиреязвенной, листериозной, противорожистой, псевдомонозной, бруцеллезной, туберкулезной, овисной и др.
Во всех случаях при наблюдении за ре40 акцией в течение 4 мин получены отрица- тельные результаты, указывающие на высокую степень видовой специфичности антигена, Слабые признаки агглютинации проявляются при выдерживании смеси
45 антигена с некоторыми сыворотками более
4 мин, Положительный результат получен при испытании антигена с мелиоидозной сывороткой в течение 0,5-4 мин, что обьясняется
50 очень близкой антигенной структурой возбудителя сапа и мелиоидоза, Пример 4. Чувствительность реакции агглютинации с цветным сапным антигеном определяют при исследовании 2535 проб сыворотки крови лошадей в стране, неблагополучной по сапу. Живогных одновременно обследуют на can двукратной внутрикожной маллеиновой пробой и клиническим осмотром, кровь исследуют в PCK с сапным антигеном для PCK.
1837889 с
P ло (с ва ж ня ся н м те
4 и р
ro ти с
Составитель Н. Букова
Техред М.Моргентал
Корректор Н. Кешеля дактор
Результаты исследования представлев таблице.
Иэ полученных данных следует, что PA азработанным антигеном в сравнении с
К выявляет вдвое большее количество адей, зараженных возбудителем сапа ответственно, 4.6 и 2,2ф к числу обследоных), а также определенное количество вотных, которые по результатам примещихся методов исследования считаютздоровыми.
Пример 5. Проводят проверку активти антигена испытанием его с гиперимнными сапными сыворотками при пературе 4-6 и 20-25 С. В течение 0,5ин появились практически равноценные ожительные реакции при обеих темперах во всех разведениях сывороток, что орит о возможности использования анена для постановки PA при любых плюых температурах.
Использование пластинчатой реакции лютинации с цветным сапным антигеном етеринарной практике позволяет повыь эффективность экспресс-диагностики лезни, расширить ассортимент высокоэффективных диагностикумов, пригодных к использованию в лабораторных и полевых условиях.
5 Формула изобретения
Антиген для диагностики сапа, содержащий клетки возбудителя Pseudomonas
mallei в разбавителе, отл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения активности и
10 специфичности. из клеток возбудителя он содержит окрашенные клетки штамма
Pseudomonas mallei М 5584, а в качестве раэбавителя — буферный раствор, включающий молочную кислоту, гидроокись натрия, 15 хлорид натрия и фенол в дистиллированной воде, с рН 3,0-4,0 при следующем соотношении компонентов:
Окрашенные клетки штамма
Pseudomonas mallei
М 5584 (50 — 170)х х10 кл/мл
Молочная кисло а 120-350 г
Гидроокись натрия 18-22 г
Хлорид натрия 8,0—9,0 г
Фенол 4,5-,5,5 г
Дистиллированная вода До 1 л.
